PAS染色法

PAS染色法Periodic Acid-Schiff stain)在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

PAS染色又称过碘酸雪夫染色,糖原染色。一般用来显示糖元和其它多糖物质。 

原理:过碘酸能使细胞内的多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,红色,定位于胞浆上。

Carnoy固定液: 纯酒精60 ml  冰醋酸10ml氯仿 30ml,也可以选用75%酒精。

1) 过碘酸酒清夜配法:

过碘酸(HIO4·2H2O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml。

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周。

2)Schiff氏液:

0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解。冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸,冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。

3) Schiff氏酒精液配置 Schiff氏液 11.5ml  1N HCI 0.5ml  纯酒精 23ml

4) 亚硫酸水 1%偏重亚硫酸钠10ml  1N HCI 10ml  蒸馏水 180ml的树胶溶解。

5)哈瑞或迈耶苏木精

1. 石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗);

2. 蒸馏水洗;

3. 过碘酸酒清夜10min;

4. 自来水冲洗10min;

5. Schiff氏液10min;

6. 流水冲洗5min;

7.用哈瑞苏木精或迈耶苏木精染核3min(细胞核染色过深可用盐酸酒精分化);

8. 流水冲洗5min;

9. 常规脱水、透明、封固。

PAS阳性为红色,细胞核蓝色。

1、10g/L过碘酸液

2、Schiff染液:

碱性品红 0.5g

DH2O 100ml

煮沸后,待片刻,加入碱性品红,振荡数分钟使品红溶解,冷至50℃加入1M的盐酸20ml,混匀。待冷却至25℃加入偏重亚硫酸钠0.5g,混合,置于带塞的棕色瓶中,放于暗处24小时,染液为无色,如为微红则加活性炭1-2g,混合过滤,如过滤液仍有红色,应再加少许活性炭,时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色瓶内保存在冰箱备用,如变为红色,则不能使用。

4、苏木素液:

苏木素 0.9g

95%乙醇 10ml

铵(钾)明矾 20g

DH2O 200ml

将苏木素溶于95%的乙醇,钾明矾溶于水(可加热),然后将苏木素液加入明矾液中混合,用强火煮沸后加氧化汞0.5g,迅速搅拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日过滤,临用时取此液95ml加冰醋酸5ml,可使细胞着色清楚。

1、将新鲜血片或骨髓片用95%乙醇固定10分钟;

2、10g/L过碘酸液作用20分钟;

3、DH2O洗涤几次,晾干;

4、Schiff染液,60分钟;

5、用自来水洗涤15分钟(细水长流冲洗);

6、苏木素染液10分钟;

7、自来水冲洗15分钟,待干。

阳性反应,胞浆呈红色,阴性反应,胞浆呈无色;在正常血片中RBC不染色;PLT染成深红色;中性粒细胞胞浆染成红色或深红色,有些细胞有阳性颗粒;单核细胞的胞浆染成淡红色,可含有细小或粗大阳性颗粒;少数淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒;正常骨髓的幼稚细胞和有核RBC都不染色;巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。

随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ,心肌病变及其他心血管疾病的诊断 ,糖原累积病诊断和研究 ,糖尿病的诊断和研究 ,用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外 ,还可以观察肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、阿米巴滋养体和霉菌的着色。临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。 

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